Methylrot-Test zur Bestimmung der Fähigkeit von Bakterien, Glukose zu verwenden (mit Abbildung)
Lesen Sie diesen Artikel, um mehr über den Methylrot-Test (MR-Test) zu erfahren, um herauszufinden, inwieweit Bakterien die Glukose mit der Produktion einer stabilen Säure als Endprodukt nutzen können!
Prinzip:
Einige Bakterien haben die Fähigkeit, Glukose zu verwenden und diese als Endprodukt in eine stabile Säure wie Milchsäure, Essigsäure oder Ameisensäure umzuwandeln.
Diese Bakterien wandeln anfänglich Glukose zu Brenztraubensäure um, die über den gemischten Säureweg weiter metabolisiert wird, um die stabile Säure zu erzeugen.
Die Art der erzeugten Säure unterscheidet sich von Spezies zu Spezies und hängt von den spezifischen enzymatischen Wegen ab, die in den Bakterien vorhanden sind. Die so erzeugte Säure verringert den pH-Wert auf 4, 5 oder darunter, was durch eine Farbänderung von Methylrot von Gelb nach Rot angezeigt wird.
Beim Methylrottest (MR-Test) werden die Testbakterien in einer Nährlösung gezüchtet, die Glucose enthält. Wenn die Bakterien die Fähigkeit haben, Glucose unter Bildung einer stabilen Säure zu verwenden, ändert sich die Farbe des Methylrots von gelb nach rot, wenn es in die Kulturkultur gegeben wird.
Erforderliche Materialien:
Reagenzgläser, Erlenmeyerkolben, Wattestopfen, Impföse, Autoklav, Bunsenbrenner, Laminar-Flow-Kammer, Entsorgungsgefäß, Inkubator, MR-VP-Bouillon (Methylrot-Voges-Proskauer-Bouillon oder Glucosephosphat-Bouillon), Methylrot-Lösung, isolierte Kolonien oder Reinkulturen von Bakterien.
Verfahren:
1. Die Inhaltsstoffe des MR-VP-Bouillonmediums (das Glukose als Hauptkomponente enthält) oder seines für 100 ml der Bouillon benötigten Fertigpulvers wird abgewogen und in 100 ml destilliertem Wasser in einem 250-ml-Erlenmeyerkolben durch Schütteln und Auflösen gelöst wirbelnd MR-VP-Bouillon wird auch als Glucosephosphat-Bouillon bezeichnet (Abbildung 7.4).
2. Sein pH-Wert wird unter Verwendung eines pH-Papiers oder eines pH-Meters bestimmt und mit 0, 1 N HCl auf 6, 9 eingestellt, wenn es mehr ist, oder mit 0, 1 N NaOH, wenn es weniger ist. Der Kolben wird gegebenenfalls erhitzt, um die Bestandteile vollständig aufzulösen.
3. Die Brühe wird in fünf Reagenzgläser (je ca. 10 ml) verteilt, mit Watte verstopft, mit Bastelpapier abgedeckt und mit Faden oder Gummiband gefesselt.
4. Die Bouillonröhrchen werden 15 Minuten bei 121 ° C (15 psi Druck) in einem Autoklaven sterilisiert.
5. Man lässt die Bouillonröhrchen auf Raumtemperatur abkühlen.
6. Die Testbakterien werden aseptisch, vorzugsweise in einer Kammer mit laminarer Strömung, mit Hilfe einer über Bunsenflamme sterilisierten Impföse in die Brühe geimpft. Die Schlaufe wird nach jeder Impfung sterilisiert.
7. Die inokulierten Bouillonröhrchen werden 24 bis 48 Stunden bei 37 ° C in einem Inkubator inkubiert.
8. Alkoholische Lösung von Methylrot (3-4 Tropfen) wird in jedes Reagenzglas getropft.
Beobachtungen:
1. Rote Farbe produziert: MR-positiv (dh die Bakterien haben Glukose in eine stabile Säure umgewandelt, was durch Umwandlung von Methylrot von gelber zu roter Farbe angezeigt wird. Dies zeigt eine gemischte Säurefermentation an).
2. Rote Farbe nicht produziert: MR-negativ (dh die Glucose im Medium wurde nicht in eine stabile Säure umgewandelt. Dies weist auf eine Butylenglycol-Fermentation hin).
