Fluoreszierende in situ Hybridisierung (FISH)

In diesem Artikel werden wir über Fluorescent In Situ Hybridization (FISH) diskutieren.

Es ist eine Labortechnik, mit der bestimmt wird, wie viele Kopien des spezifischen DNA-Segments in einer Zelle vorhanden sind. Es identifiziert spezifische Chromosomenbereiche in zytologischen Präparaten. Im Labor wird ein DNA-Abschnitt chemisch modifiziert oder durch Fluoreszenzfarbstoff angefärbt, und wenn er unter dem Fluoreszenzmikroskop untersucht wird, sieht er sehr hell gefärbt aus.

Die Fluoreszenz-in-situ-Hybridisierung hat die Empfindlichkeit, Spezifität und Auflösung der Chromosomenanalyse stark erhöht.

Die Vorteile dieser Technik sind zahlreich, einige werden jedoch wie folgt erwähnt:

(1) Die Auflösung dieser Methode ist viel besser als die der herkömmlichen Chromosomen-Banden und hat eine Länge von etwa 2 Mega-Basen (Mb).

(2) Das Protokoll dieser Technik ist einfach und gilt sowohl für sich teilende Zellen als auch für sich nicht teilende Zellen. Diese Technik kann einen Bereich von Mutationen identifizieren, einschließlich Deletion, Duplikation, Aneuploidie und Vorhandensein derivativer Chromosomen. Diese Technik wird auch häufig zur Überwachung von Rezidiv- oder Resterkrankungen bei Patienten mit Knochenmarktransplantationen eingesetzt.

FISH (Fluorescent In Situ Hybridization) wird im Allgemeinen für stimuliertes peripheres Blut sowohl für die Chromosomenanalyse als auch für die Identifizierung spezifischer Translokationen und Deletionen durchgeführt. Beispielsweise wird es verwendet, um das Philadelphia-Chromosom (Ph ¹ ) zu demonstrieren, das durch die Translokation zwischen Chromosom 9 und 22 gebildet wird, und verursacht eine chronische myeloische Leukämie (CML).

Es wird auch zur Identifizierung der Translokation zwischen Chromosom 8 und 14, die das Burkitt-Lymphom verursacht, und zwischen Chromosom 18 und 14, die zu B-Zell-Leukämie führt, verwendet. Es wird auch zur Diagnose des Down-Syndroms verwendet.

Im FISH-Verfahren können Zellkulturen hergestellt werden. Die Metaphase / Prometaphase-Chromosomen werden auf einem Objektträger fixiert. Darüber hinaus kann FISH zur Analyse von Interphasenkernen modifiziert werden. Dann werden die Chromosomen denaturiert; Eine markierte DNA-Sonde wird dann eingeführt und dann mit dem Chromosom auf dem Objektträger hybridisiert. Daher wird der Begriff "in situ" Hybridisierung angegeben.

Die DNA-Sonden sind mit Fluorochrom markiert, eine solche Sonde liefert ein Fluoreszenzsignal und konnte mit Fluoreszenzmikroskopie gesehen werden. Die Fluoreszenz konnte mit Hilfe von Filtern im Fluoreszenzmikroskop abgezogen werden.

FISH-Sonden haben eine Länge von etwa 40 Kilo Basen (kb) und werden als doppeltes Fluoreszenzsignal an jedem Element eines Chromosomenpaares nachgewiesen. Der Doppelpunkt entspricht den Signalen von jeder der beiden ausgerichteten Schwesterchromatiden.

In seiner einfachen Anwendung wäre ein normales FISH-Muster für eine solche Sonde zwei Sätze von Doppelpunkten, ein Satz für jedes Mitglied der normalerweise gepaarten Chromosomen. Diese Doppelpunkte verschmelzen oft zu einem Signal. Zellen, die für die fragliche chromosomale Region monosomisch sind, würden nur einen einzigen Satz Doppelpunkt pro Kern zeigen, während Trisomzellen drei Sätze Doppelpunkte zeigen würden.