Nützliche Hinweise zu Enzym-Papain und Enzym-Pepsin
Immunglobuline sind Proteine und sind im Allgemeinen gegen die Verdauung durch Enzyme resistent.
Enzym Papain und Pepsin spalten jedoch die Immunglobulinmoleküle. Die durch Papain und Pepsin erzeugten Fragmente eignen sich für Untersuchungen zur Struktur und Funktion von Immunglobulinen. Die Spaltstellen dieser beiden Enzyme sind jedoch unterschiedlich (Abbildung 9.5).
Abb. 9.5: Schematische Darstellung der proteolytischen Fragmentierung von Immunglobulin durch kurzzeitige Behandlung mit den Enzymen Papain und Pepsin.
Enzym-Papain spaltet das Immunglobulin an der N-terminalen Seite der Disulfidbindung zwischen den schweren Ketten und produziert drei Fragmente (zwei Fab-Fragmente und ein Fc-Fragment). Enzym-Pepsin spaltet das Immunglobulin an der C-terminalen Region und produziert ein großes Fragment (das zwei Fab-Regionen enthält), das als F (ab ') 2 bezeichnet wird . Die verbleibenden schweren Ketten auf der C-terminalen Seite werden in mehrere kleine Peptide gespalten
1. Enzym Papain:
Enzym-Papain spaltet die Gelenkregion an der N-terminalen Seite der Disulfide zwischen den schweren Ketten, was zur Bildung von drei Fragmenten führt. (Zwei Fragmente, die die variable Region enthalten, und ein Fragment, das die CH2- und CH3- Regionen enthält). Die zwei Fragmente, die die variable Region enthalten, werden aufgerufen. Fab-Fragmente (dh Fragment-Antigen-Bindung), da sie die Antigen-Bindungsstellen aufweisen.
Das dritte Fragment umfasst die carboxylterminalen Abschnitte beider schweren Ketten, die durch Disulfide zusammengehalten werden. Im Allgemeinen ist die Struktur des dritten Fragments für viele verschiedene Immunglobulinmoleküle identisch.
Daher können Fragmente dieser Art auch dann kristallisiert werden, wenn sie aus vielen verschiedenen Immunglobulinen bestehen. Daher wird dieses Fragment als kristallisierbares Fragment oder Fc-Fragment bezeichnet. Die meisten sekundären biologischen Eigenschaften von Immunglobulin hängen von den Sequenzen in der Fc-Region ab. Dies ist auch die Region, die von den Fc-Rezeptoren vieler Zelltypen erkannt wird.
2. Enzym Pepsin:
Enzym-Pepsin spaltet das Immunglobulin auf der carboxyterminalen Seite der Gelenkregion, was zu einem großen Fragment namens F (ab ') 2 führt . Das F (ab ') 2 weist zwei Fab-Fragmente auf, die durch Disulfidbindungen verbunden sind. Die Fc-Region wird durch Pepsin weitgehend abgebaut, und nach dem Pepsinverdau verbleibt normalerweise kein intaktes Fc-Fragment.
