Anmerkungen zur Studie zur Advance-Flow-Zytometrie

Der unten genannte Artikel enthält Anmerkungen zur Studie zur Durchflusszytometrie.

Die Durchflusszytometrie ist die jüngste Technik, die in den letzten zwei Jahrzehnten entwickelt wurde, um den Zellinhalt und insbesondere die Effizienz der Kernpackung zu untersuchen. Neben NPE konnten die physikalischen und chemischen Eigenschaften der Zellinhalte und die pathologischen Zustände schnell und korrekt analysiert werden.

Die Durchflusszytometer sind in Form einer Maschine auf dem Markt erhältlich. Die Maschine besteht aus einem Fluidsystem, einem optischen System zum Sammeln von Lichtsignalen, die als Zellen erzeugt werden, die den Laser passieren. Die Maschine ist auch mit einem elektronischen System versehen, das die Lichtsignale in proportionale elektronische Signale umwandelt, die schließlich für die Computeranalyse digitalisiert werden.

Etwa 5000 Zellen pro Sekunde, die einzeln nacheinander aus der Suspension einer heterogenen Population gemessen wurden, konnten gescannt werden.

Das ausgereifte Fludics-System ist mit Laser, Optik, Elektronik und Sortierung ausgestattet. Das Fludics-System verfügt über einen fluoreszenzaktivierten Zellsortierer (FACS-Calibur-Fluidsystem). Während des Sortierens kann es die Genauigkeit der Einzelzellzählung sortieren.

Das Ergebnis ist eine hohe Reinheit mit einer Erholung, die zwischen Einzelzelle und Erholung liegt. Es ist elektronisch mit drei Tasten zur Auswahl des Betriebsmodus PRIME, STAND BY und RUN gesteuert. Die Rate ist als hoch eingestellt; (60 ul / min), Medium (35 ul / min) und niedrig (12 ul / min).

Die Anregung und Emission, Fluorochrome, Filter und Farbkompensation sind der wichtige Teil der Ausrüstung. Der 530/30 BP-Filter misst Signale, die von Fluorescence Isothiocyanate (Stain) abgegeben werden. Wenn Phycoerythrin und Popidium Iodide verwendet werden, wird ein 585/42 BP-Filter verwendet. 650 LP-Filter werden verwendet, wenn Peridinin-Chlorophyll und 7-Amino-Actinomycin D-Signal erzeugt werden.

Die Lasersignale werden von der Becton Dickinson Cell Quest Software gelesen. Fluoreszierende Detektor- und Bandfilter sind gemäß den Anweisungen und Anforderungen des Instruments einzustellen. Argonlaserquellen mit 488 nm und ein Bandpassfilter mit 623 nm sind üblicherweise in Geräten vorhanden.

Es hat auch ein System zur Anzeige von Daten und Analysen. Die wichtigen Parameter sind Histogramme, Multiparameterdaten sowie Listenmodusdaten und Gating. Die maschinelle Analyse der Daten wird mit Hilfe der mitgelieferten Software durchgeführt und es werden Histogramme des DNA-Gehalts gegen die Anzahl erstellt, die automatisch auf dem Computer angezeigt werden (49.2).

Die Anwendungen von Durchflusszytometern sind zahlreich und sind ein Segen für die biologische Forschung und für die klinischen Untersuchungen bei vielen menschlichen Krankheiten. Das Durchflusszytometer dient zur Untersuchung von Blutlinien im hämopoitischen Gewebe der Kopfnierenzellen von atmungsaktiven Fischen.

Es kann leicht sein, zwischen der pluripotenten hämatopoetischen Stammzelle und dem Phänotyp der reifen funktionellen peripheren Lymphozytenpopulation zu unterscheiden. Die bedeutende Verwendung dieses Geräts besteht darin, die Apoptose oder den Zelltod zu untersuchen und auch die Nekrose von Zellen aufgrund von Pestizidtoxizität zu untersuchen.

Durch Weitwinkelstreuungssignale können Lymphozyten, Monozyten und Granulozyten aus lysierten Vollblutproben aufgelöst werden. Es ist auch möglich, Plättchen vom Hintergrundrauschen zu trennen. Es wird für das Immunsystem und für die Immunphänotypisierung verwendet. Es wird zur Untersuchung von Leukämie und Lymphom, zur Transplantationsforschung, zur Aufzählung von Retikulozyten und zur Analyse von zellulären DNA-Inhalten verwendet.

Aufgrund des Pulsverarbeitungsmechanismus ist dies bei der DNA-Zellzyklusanalyse von Vorteil. Die NPE-Analyse dient der Unterscheidung zwischen primärem Brustkrebs und Metastasierung, primärem Dickdarmkrebs und Darmmetastasen sowie Magen- und Eierstockkrebs (Abb. 49.2).

Das verwendete Protokoll ist, dass die ersten Zellen in 3% Paraformaldehyd entfernt und fixiert wurden. Sie werden mit 0, 5% Triton x 100 permeabilisiert. Die Kern-DNA wurde dann nach der RNase-Behandlung unter Verwendung des Cycle Test Plus-DNA-Kits mit Popidiumiodid markiert.