Stärkehydrolyse Testen Sie Bakterien auf ihre Fähigkeit, Stärke zu hydrolysieren

Stärkehydrolyse Testen Sie Bakterien auf ihre Fähigkeit, Stärke zu hydrolysieren!

Prinzip:

Einige Bakterien haben die Fähigkeit, Stärke zu hydrolysieren, da sie das saccharolytische Enzym produzieren können.

Während die Stärke mit Jod eine dunkelblaue Farbe annimmt, erhalten ihre hydrolysierten Endprodukte mit Jod keine solche dunkelblaue Farbe.

Im Stärkehydrolyse-Test werden die Testbakterien auf Agarplatten gezüchtet, die Stärke enthalten. Nachdem Kolonien der Bakterien sichtbar sind, werden die Platten mit Jodlösung geflutet. Wenn die Bakterien die Fähigkeit haben, Stärke zu hydrolysieren, hydrolysieren ihre Kolonien die Stärke in dem Medium in den sie umgebenden Bereichen, während die übrigen Plattenbereiche nicht hydrolysierte Stärke enthalten.

Infolgedessen bilden sich beim Fluten mit Jodlösung transparente klare Zonen um die Kolonien, da die um diese gebildeten Hydrolyseprodukte keine dunkelblaue Farbe mit Jod bilden. Andererseits werden die übrigen Bereiche der Platten dunkelblau, da Jod mit der nicht hydrolysierten Stärke in diesen Bereichen eine dunkelblaue Farbe bildet.

Erforderliche Materialien:

Petrischalen, Erlenmeyerkolben, Wattestäbchen, Impföse, Autoklav, Bunsenbrenner, Laminar-Flow-Kammer, Entsorgungsgefäß, Inkubator, Stärkeagar, Lugol-Jodlösung, isolierte Kolonien oder Reinkulturen von Bakterien.

Verfahren:

1. Zwei Petrischalen werden gereinigt, mit Bastelpapier abgedeckt und mit Faden oder Gummiband gebunden (Abbildung 7.21). Dieser Schritt sowie die Sterilisation der Petrischalen in Schritt 6 entfällt, wenn ofensterilisierte Petrischalen direkt verwendet werden.

2. Die Bestandteile des Stärkeagarmediums (das als Hauptkomponente Stärke enthält) oder seines für 100 ml des Mediums erforderlichen Fertigpulvers werden abgewogen und in 100 ml destilliertem Wasser in einem 250-ml-Erlenmeyerkolben durch Schütteln und Verwirbeln gelöst.

3. Sein pH-Wert wird unter Verwendung eines pH-Papiers oder eines pH-Meters bestimmt und unter Verwendung von 0, 1 N HCl auf 7, 2 eingestellt, wenn weniger oder weniger 0, 1 N NaOH verwendet wird.

4. Der Kolben wird erhitzt, um den Agar vollständig in dem Medium aufzulösen.

5. Der Kolben ist mit Baumwolle verstopft, mit Bastelpapier bedeckt und mit Faden oder Gummiband gebunden.

6. Die zwei Petrischalen und der konische Kolben, der Stärke-Agarmedium enthält, werden bei 121 ° C (15 psi Druck) 15 Minuten in einem Autoklaven sterilisiert.

7. Nach der Sterilisation werden sie aus dem Autoklaven genommen und einige Zeit abkühlen gelassen, ohne dass sich das Medium verfestigt. Die Kühlung des Mediums verhindert die Kondensation und Ansammlung von Wassertropfen in den Platten. Wenn das Medium bereits während der Lagerung hergestellt und verfestigt wurde, muss es durch vorsichtiges Erhitzen verflüssigt werden, bis es vollständig schmilzt.

8. Um Stärke-Agarplatten herzustellen, bevor das sterilisierte Stärke-Agarmedium sich abkühlt und verfestigt, wird es in warmem geschmolzenem Zustand aseptisch, vorzugsweise innerhalb einer Laminar-Flow-Kammer, in die zwei sterilisierten Petrischalen (jeweils etwa 20 ml) gegossen Das geschmolzene Medium bedeckt den Boden der Petrischalen vollständig.

Dann werden die Platten mit ihren Deckeln bedeckt und können abkühlen, um das Medium in ihnen zu verfestigen. Wasserdampf, der an der Innenfläche der Platten und Deckel kondensieren kann, wird verdampft, indem die Platten und Deckel etwa 1 Stunde in einem Inkubator bei 37 ° C in einer umgekehrten Position gehalten werden.

9. Jede Platte ist an der Unterseite in vier Viertel markiert.

10. Die "Spot-Inokulation" der Testbakterien erfolgt aseptisch, vorzugsweise in einer Laminar-Flow-Kammer, in der Mitte jedes Viertels, indem mit Hilfe einer flammsterilisierten Schleife ein Spot (oder ein kleiner Abstrich) der Bakterien erzeugt wird. Die Schlaufe wird nach jeder Impfung sterilisiert.

11. Die inokulierten Platten werden 24 bis 48 Stunden lang in umgekehrter Position bei 37 ° C in einem Inkubator inkubiert, bis Kolonien der Bakterien sichtbar sind.

12. Die Platten werden mit Lugols Jodlösung geflutet.