Vorbereitung der Nassbefestigung von Bakterien zur Beobachtung ihrer natürlichen Form und Größe

Bemühen Sie sich, das Nassregen eines Bakteriums vorzubereiten, um dessen natürliche Form, Größe und Anordnung im Lebenszustand zu beobachten.

Zweck:

Bakterienzellen können leicht und deutlich gesehen werden, wenn sie durch Verfärbungen gefärbt sind. Bei den meisten Färbungsprozessen sterben die Zellen jedoch ab und verlieren ihre natürliche Form und Größe aufgrund von Wärmefixierung sowie durch Einwirkung von Chemikalien (Flecken, Säuren und Bakterien) Alkohol).

Ziel dieses Experiments ist es, die natürliche Form, Größe und Anordnung von Bakterien im Lebenszustand zu beobachten. Bei der Nassmontage kann keine Beweglichkeit beobachtet werden, da die Zellen zwischen Objektträger und Deckglas gedrückt werden.

Prinzip:

Bei der Nassbefestigung wird ein Tropfen der Bakteriensuspension auf einen Objektträger aufgebracht, mit einem Deckglas bedeckt und unter einem Verbundmikroskop oder vorzugsweise unter einem Dunkelfeld- oder Phasenkontrastmikroskop unter Verwendung eines Ölimmersionsobjektivs beobachtet.

Erforderliche Materialien:

Objektträger, Deckglas, Vaseline, Immersionsöl (Zedernwolleöl oder Paraffinöl), Bakterienkultur (auf festem Medium oder in flüssiger Suspension), Schleife und Mikroskop (Compound, Dunkelfeld oder Phasenkontrast).

Verfahren:

1. Ein Objektträger wird ordnungsgemäß unter Leitungswasser gereinigt, sodass das Wasser nicht als Tropfen auf seiner Oberfläche verbleibt (Abbildung 5.2).

2. Die Folie wird durch Abwischen mit Lappenpapier getrocknet und anschließend über die Flamme bewegt oder in der Sonne aufbewahrt.

3. Wenn die Bakterien auf einem festen Medium gezüchtet wurden (als Schrägkultur oder Plattenkultur), wird ein Tropfen destilliertes Wasser in die Mitte des Objektträgers gegeben. Eine Schleife wird sterilisiert, indem sie über einer Flamme auf Glut erhitzt wird. Es wird auf Raumtemperatur abgekühlt. Dann wird aseptisch ein kleiner Teil der Bakterienkultur durch die Schleife geschabt und auf den Wassertropfen übertragen.

Eine Bakteriensuspension wird durch sanftes Mischen der Bakterienschleife im Wassertropfen hergestellt, sodass sich der Tropfen nicht ausbreitet. Wenn sie in einem flüssigen Medium als Suspension gezüchtet werden, wird aseptisch ein Tropfen der Bakteriensuspension direkt in der Mitte des Objektträgers platziert, wobei eine flammensterilisierte Schleife verwendet wird.

4. Vaseline oder ähnliches Material wird um den Tropfen herum aufgetragen, so dass die Verdampfung und die Wirkung des Luftstroms minimiert werden, wenn der Deckglättchen den Tropfen bedeckt.

5. Ein Abdeckstreifen wird in einer schrägen Position in der Nähe des Tropfens der Bakteriensuspension aufbewahrt, wobei eine Kante den Objektträger berührt.

6. Das Deckglas wird langsam abgesenkt, bis es die Oberfläche des Tropfens berührt.

7. Dann wird das Deckglas freigegeben, so dass sich der Tropfen der Bakteriensuspension in alle Richtungen unter dem Deckglas ausbreitet. Es ist darauf zu achten, dass sich in der Suspension keine Luftblase bildet.

8. Der Objektträger wird auf der Bühne eines Verbundmikroskops befestigt und unter Verwendung von Objektiven mit geringer Leistung und hoher Trockenleistung beobachtet. Dann wird ein Tropfen Immersionsöl auf den Deckglas aufgetragen und unter Verwendung eines Ölimmersionsobjektivs des Mikroskops beobachtet. Vorzugsweise sollte für eine klare Beobachtung ein Phasenkontrast- oder Dunkelfeldmikroskop verwendet werden.