Experiment zur Ermittlung der Fähigkeit von Bakterien, verschiedene Aminosäuren zu decarboxylieren (mit Abbildung)

Experimentieren Sie, um herauszufinden, wie Bakterien verschiedene Aminosäuren decarboxylieren können!

Prinzip:

Einige Bakterien haben die Fähigkeit, verschiedene Aminosäuren zu entsprechenden Aminen und CO ₂ zu decarboxylieren, da sie entsprechende "Aminosäure-Decarboxylase" -Enzyme produzieren können.

Unter ihnen kann jedes Bakterium nur einige der Aminosäuren decarboxylieren, während es die anderen nicht decarboxylieren kann.

Daher sind die Aminosäuren, die ein Bakterien decarboxylieren kann, und die Aminosäuren, die es nicht kann, das Merkmal der Bakterien. Der Aminosäure-Decarboxylasetest wird durchgeführt, um die Fähigkeit eines Bakteriums, Aminosäuren wie Lysin, Ornithin und Argentin unter Bildung von C0 ₂ und entsprechenden Aminen wie Cadaverin, Putrescin und Agmatin zu decarboxylieren, getrennt zu testen.

Wenn die Bakterien können

eine oder mehrere der Aminosäuren decarboxylieren, werden entsprechende Amine hergestellt, die alkalisch (basisch) sind und daher den pH-Wert erhöhen, indem sie die Farbe von Bromkresolpurpur von gelb nach violett verändern.

Im Aminosäure-Decarboxylasetest werden die Testbakterien anaerob in einer Nährlösung gezüchtet, die Glucose, Bromcresolpurpur und eine der Aminosäuren enthält. Die Farbe der Brühe ändert sich anfänglich von Purpur zu Gelb aufgrund des durch die Fermentation von Glucose erzeugten Säuregehalts. Wenn die Bakterien die Fähigkeit haben, die Aminosäure zu decarboxylieren, ändert sich die Farbe der Bouillon von gelb nach violett.

Erforderliche Materialien:

Reagenzgläser, Erlenmeyerkolben, Wattestopfen, Impföse, Autoklav, Bunsenbrenner, Laminar-Flow-Kammer, Entsorgungsgefäß, Inkubator, Aminosäure-Decarboxylase-Bouillon, Aminosäuren (Lysin, Ornithin, Arginin), flüssiges Paraffin, isolierte Kolonien oder Reinkulturen Bakterien.

Verfahren:

1. Die Inhaltsstoffe des Aminosäure-Decarboxylase-Nährmediums (das Glucose und Bromcresol-Purpur als Hauptkomponenten enthält) oder das für 400 ml der Bouillon benötigte fertige Pulver werden abgewogen und in 400 ml destilliertem Wasser in einem 500-ml-Erlenmeyerkolben gelöst durch Schütteln und Verwirbeln (Abbildung 7.11).

2. Sein pH-Wert wird unter Verwendung eines pH-Papiers oder eines pH-Meters bestimmt und mit 0, 1 N HCl auf 7, 2 eingestellt, wenn der pH-Wert höher ist, oder mit 0, 1 N NaOH, wenn es weniger ist. Der Kolben wird gegebenenfalls erhitzt, um die Bestandteile vollständig aufzulösen.

3. Die 400 ml-Bouillon wird in vier 250-ml-Erlenmeyerkolben verteilt, so dass jeder Kolben 100 ml der Bouillon enthält.

In drei dieser Kolben werden drei Aminosäuren, wie Lysin, Ornithin und Arginin, getrennt (jeweils 0, 5 g) gegeben, und eine wird ohne Aminosäure gehalten, um als Kontrolle zu dienen. Die Kontrolle wird verwendet, um zwischen den zweistufigen Farbänderungen im Testmedium zu unterscheiden (dh von violett nach gelb und von gelb nach violett).

5. Die Brühen in den vier Erlenmeyerkolben werden in vier getrennten Reagenzglassätzen (je ca. 10 ml) verteilt, die mit Baumwolle verstopft sind, mit Bastelpapier bedeckt und mit Faden oder Gummiband zusammengebunden sind.

6. Die Bouillonröhrchen werden 15 Minuten bei 121 ° C (15 psi Druck) in einem Autoklaven sterilisiert.

7. Man lässt die Bouillonröhrchen auf Raumtemperatur abkühlen.

8. Flüssiges Paraffin wird durch Erhitzen bei 180 ° C für 3 Stunden in einem Heißluftofen sterilisiert.

9. Die Testbakterien werden aseptisch, vorzugsweise in einer Kammer mit laminarer Strömung, mit Hilfe einer über Bunsenflamme sterilisierten Impföse in die Brühe geimpft. Die Schlaufe wird nach jeder Impfung sterilisiert.

10. Das sterilisierte flüssige Paraffin wird vorsichtig aseptisch in die beimpften Röhrchen (ca. 1 cm hoch auf dem Medium) gegossen, um anaerobe Bedingungen bereitzustellen.

11. Die inokulierten Bouillonröhrchen werden bei 37 ° C in einem Inkubator inkubiert und täglich beobachtet, bis der Test positiv ist, oder für einen Zeitraum von maximal 4 Tagen.