Citrat-Nutzungstest zur Überprüfung der Fähigkeit von Bakterien, Citrat als Kohlenstoffquelle zu verwenden

Versuchen Sie, den Citratverwendungstest durchzuführen, um herauszufinden, inwieweit Bakterien Bakterien als einzige Kohlenstoffquelle nutzen können.

Prinzip:

Einige Bakterien können in Medien ohne organisches C und N wachsen.

Sie können Natriumcitrat als einzige Quelle für C und Ammoniumdihydrogenphosphat (NH ₄ H ₂ P0 ₄ ) als einzige Quelle für N verwenden. Sie verwenden NH ₄ H ₂ P0 ₄, um N unter Bildung von NH _{3 zu gewinnen}, was die Menge an erhöht pH-Wert, der zu einer Farbänderung von Bromthymolblau von Grün (pH = 6, 9) nach Blau (pH über 7, 6) führt.

Im Citratverwendungstest werden die Testbakterien auf Agarschrägchen gezüchtet, die kein organisches C oder N enthalten, sondern eher Natriumcitrat, NH ₄ H ₂ P0 ₄ und Bromthymolblau enthalten. Wenn die Bakterien die Fähigkeit haben, Citrat als einzige Quelle für C zu verwenden, zeigt es Wachstum auf den Schrägen. Es verwendet auch NH ₄ H ₂ P0 ₄ als einzige N-Quelle, was zu einer Farbänderung der Schrägen von Grün nach Blau führt.

Erforderliche Materialien:

Reagenzgläser, Erlenmeyerkolben, Wattestopfen, Impfnadel, Autoklav, Bunsenbrenner, Laminar-Flow-Kammer, Entsorgungsglas, Inkubator, Simmons Citrat-Agar, isolierte Kolonien oder Reinkulturen von Bakterien.

Verfahren:

1. Die Bestandteile von Simmons Citrat-Agarmedium (das Natriumcitrat, NH ₄ H, P0 ₄ und Bromthymolblau als Hauptbestandteile enthält) oder sein für 100 ml des Mediums erforderliches Fertigpulver werden eingewogen und in 100 ml destilliert Wasser in einem 250-ml-Erlenmeyerkolben durch Schütteln und Verwirbeln (Abbildung 7.6).

2. Sein pH-Wert wird unter Verwendung eines pH-Papiers oder eines pH-Meters bestimmt und mit 0, 1 N HCl auf 0, 1 eingestellt, wenn es mehr ist, oder mit 0, 1 N NaOH, wenn es weniger ist.

3. Der Kolben wird erhitzt, um den Agar vollständig in dem Medium aufzulösen.

4. Bevor es sich verfestigt, wird das Medium in warmem geschmolzenem Zustand in 5 Teströhrchen (jeweils ca. 20 ml) verteilt.

5. Die Reagenzgläser sind mit Baumwolle verstopft, mit Bastelpapier bedeckt und mit Faden oder Gummiband gebunden.

6. Sie werden bei 121 ° C (15 psi Druck) 15 Minuten in einem Autoklaven sterilisiert.

7. Nach der Sterilisation werden sie aus dem Autoklaven genommen und in einer schrägen Position gehalten, um das Medium abzukühlen und zu verfestigen, um die Citrat-Agar-Schrägen zu erhalten.

8. Die Testbakterien werden aseptisch, vorzugsweise in einer Laminar-Flow-Kammer, in die Schrägen inokuliert, indem sie in den Kolben stechen und mit Hilfe einer flammensterilisierten Nadel auf der Oberfläche der Schrägen streifen. Die Nadel wird nach jeder Impfung sterilisiert.

9. Die inokulierten Schrägen werden 24 bis 48 Stunden bei 37 ° C in einem Inkubator inkubiert.