2 Methoden der Elektroimmundiffusionstechniken für Antigen und Antikörper
Bei Immunodiffusionstechniken kann das Antigen und der Antikörper unter Bildung einer Präzipitinlinie diffundieren, und dies dauert länger (24 bis 72 Stunden).
Wenn die Bewegung des Antigens und / oder Antikörpers beschleunigt wird, bildet sich die Präzipitinlinie in sehr kurzer Zeit, so dass die Diagnose schnell gestellt werden kann. Dieses Ziel wird erreicht, indem Antigen und Antikörper elektrisch bewegt werden. Es gibt viele Variationen dieses Prinzips. Die zwei gebräuchlichen Methoden sind Gegenstrom-Immunelektrophorese und Laurell-Raketenelektrophorese.
Gegenstrom-Immunelektrophorese (eindimensionale doppelte Elektro-Immunodiffusion):
Auf einem Objektträger werden zwei Vertiefungen in den Agar geschnitten.
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Eine Vertiefung ist mit Antigen gefüllt und die andere Vertiefung ist mit Antikörper gefüllt.
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Die Antikörperseite des Agars ist mit der Anode verbunden, und die Antigenseite ist mit der Kathode der Elektrophoresevorrichtung verbunden.
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Bei Anwendung von Elektrizität bewegen sich die Antigen- und Antikörpermoleküle (aufgrund ihrer elektrischen Ladungen) im Agar unter dem elektrischen Einfluss.
In einem alkalischen Puffer sind die meisten der klinisch wichtigen Antigene elektronegativ und bewegen sich daher in Richtung der Anode (dh in Richtung der Antikörperwanne). Die Antikörpermoleküle sind elektrisch neutral oder schwach negativ. Normalerweise sollten sich die elektrisch negativen Antikörpermoleküle zur Anode bewegen.
Die Bewegung der Hydroneum-Ionen im Agar während der Elektrophorese ist jedoch sehr stark und zieht die schwach negativen Antikörpermoleküle in Richtung der Kathode (dh in Richtung der Antigenvertiefung). Da sich Antigen- und Antikörpermoleküle in entgegengesetzte Richtungen bewegen, treffen sie sich und bilden zwischen den beiden Vertiefungen eine Ausscheidungslinie. Die Ausfällungslinie ist in 30 Minuten sichtbar (im Gegensatz zu 24 Stunden Diffusion) und ist ungefähr 10-mal empfindlicher als Diffusion.
Zum Nachweis wird Gegenstrom-Immunelektrophorese verwendet
ein. Meningokokken-, kryptokokale und hämophile Antigene im Liquor cerebrospinalis und
b. Hepatitis-B-Oberflächenantigen im Serum.
Laurens Raketenelektrophorese (eindimensionale einzelne Elektroimmundiffusion):
Diese Technik wird verwendet, um Antigene zu quantifizieren. Der Antikörper wird mit geschmolzenem Agar gemischt und auf einen Objektträger gegossen. Nach der Verfestigung werden die Vertiefungen geschnitten und mit unterschiedlichen Antigenkonzentrationen gefüllt.
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Wenn Elektrizität angelegt wird, wird das Antigen in den Agar getrieben, der Antikörper enthält. Präzipitinlinien werden entlang der seitlichen Ränder der sich bewegenden Grenze des Antigens gebildet. Allmählich geht das Antigen durch Präzipitation verloren, so dass seine Konzentration an der Vorderkante abnimmt und die seitlichen Ränder zu einem scharfen Punkt zusammenlaufen. Somit ähnelt das resultierende Niederschlagsmuster einer Spitze oder Rakete.
Der Abstand der Spitze von der Antigenvertiefung nimmt mit zunehmender Antigenkonzentration zu. Eine Standardkurve kann unter Verwendung bekannter Antigenkonzentrationen erstellt werden. Die Konzentration eines Testantigens kann durch Interpolation der Standardkurve mit dem Abstand der gebildeten Rakete bestimmt werden.
Die Empfindlichkeit dieser Technik beträgt ungefähr 0, 5 mg / ml. Die Laurell-Technik wird auch zum Nachweis von Antigenen von Cryptococcus, Meningococcus und Hämophilus in Cerebrospinalflüssigkeit (CSF) eingesetzt.
